Scooby Doo wraz z ekipą podróżują w górę rzeki Amazonii ze słynnym komikiem i aktorem Jasonem Sudejkisem w poszukiwaniu wielkiego skarbu! Ich cel to zaginiona fabryka obuwia z 1912 roku, w której do produkcji butów używano gumy organicznej.
Podczas ich niezwykłej wyprawy niespodziewanie napotykają okropnego potwora wężo-człowieka, który najwyraźniej chce powstrzymać ich przed dotarciem do celu. Czy detektywi i Pan Sudeikis odnajdą zaginioną fabrykę? A może zły potwór na dobre zniszczy ich wyprawę?